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Starvio siRNA轉染實驗指南--培養(yǎng)基的使用

選對轉染前后以及配制轉染復合物時使用的培養(yǎng)基對于細胞實驗的成功也十分關鍵。主要是培養(yǎng)基中的血清以及抗生素的存在與否對siRNA轉染實驗的影響。

1、培養(yǎng)基中的血清對轉染實驗的影響

血清中主要含有蛋白質、生長因子、激素和其他支持細胞生長、附著和體外存活的成分。雖然它是細胞生長必需的要素,但是對于轉染實驗來說,血清并不是那么友好,何時使用、怎么使用都非常重要。

·在轉染前即鋪板時和轉染后建議使用只含血清不含抗生素的培養(yǎng)基,Starvio siRNA轉染試劑不同于一般的脂質體轉染試劑,它對細胞的毒性很低,血清的存在不會影響轉染效果,并且轉染后不需要換液,操作更加簡便;而脂質體轉染試劑本身毒性就大,在轉染過程中如果含血清,還會將血清中的蛋白帶入細胞,引發(fā)細胞毒性,從而導致細胞死亡、轉染效率降低,所以要求在轉染前換無血清培養(yǎng)基,轉染后4-6h再更換成有血清培養(yǎng)基,這其實是為了減輕轉染造成的細胞毒性。如果實驗者沒有好用的培養(yǎng)基,推薦使用DMEM源培L110KJ培養(yǎng)基或者RPMI-1640普諾賽PM150110培養(yǎng)基,這兩款產品與Starvio siRNA轉染試劑都有較好的適配性。

·另外,在配制轉染復合物的時候,若含有血清,血清中的蛋白會與轉染試劑或者siRNA結合從而干擾轉染試劑與siRNA復合物的形成,最終影響轉染效率。因此,在配制轉染復合物時,建議使用星啟百代專研的轉染增強劑,不僅可以完全替代無血清培養(yǎng)基,而且與Starvio siRNA轉染試劑整體搭配進行實驗,轉染效率更高。

2、培養(yǎng)基中的抗生素對轉染實驗的影響

抗生素本身對細胞的生長并不是必須的,但是在細胞培養(yǎng)過程中,往往存在支原體、細菌、真菌等污染,添加抗生素可以很好的防止污染。與這種積極作用不同的是,如果在轉染實驗中,添加了抗生素如常用的青霉素、鏈霉素,很可能致使細胞活性下降、轉染效率低下。原因是在進行轉染時,轉染試劑增加了細胞的通透性,這些抗生素一般情況下確實對于真核細胞無毒,但在細胞通透性增加后,抗生素也會隨之進入細胞,繼而損傷細胞。因此,整個siRNA轉染實驗過程即從接種細胞開始就要避免使用抗生素。

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