細(xì)胞密度對于siRNA轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)的影響是很大的。通常情況下，轉(zhuǎn)染試劑成功轉(zhuǎn)染siRNA的細(xì)胞會(huì)使得目標(biāo)基因表達(dá)下調(diào)，但未成功轉(zhuǎn)染的細(xì)胞卻不受影響，這時(shí)轉(zhuǎn)染效率和總的細(xì)胞數(shù)量就顯得十分重要，密度過高或過低都會(huì)影響轉(zhuǎn)染效果：

 一般細(xì)胞數(shù)量較少時(shí)，轉(zhuǎn)染效率高，但是一些轉(zhuǎn)染試劑由于本身毒性的影響，細(xì)胞數(shù)量太低時(shí)毒性就變得明顯，導(dǎo)致細(xì)胞死亡率也高，所以得到的轉(zhuǎn)染效果并不可靠；

 較多的細(xì)胞數(shù)量則會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞過度接觸和聚集在一起，這會(huì)減少轉(zhuǎn)染試劑和siRNA到達(dá)單個(gè)細(xì)胞的機(jī)會(huì)，從而降低轉(zhuǎn)染效率；并且，較高的細(xì)胞密度也可能導(dǎo)致細(xì)胞代謝活性下降，從而影響siRNA的敲除效率。

因此，在進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)時(shí)，需要根據(jù)轉(zhuǎn)染試劑和細(xì)胞類型等因素來優(yōu)化細(xì)胞密度，以提高轉(zhuǎn)染效率和減少干擾。我們建議在使用Starvio siRNA轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行轉(zhuǎn)染時(shí)，細(xì)胞密度控制在30-50%之間，考慮到細(xì)胞增殖的問題，在轉(zhuǎn)染前一天鋪板時(shí)的細(xì)胞密度一般為25%左右。如果使用24孔板進(jìn)行培養(yǎng)，細(xì)胞數(shù)一般為每孔4*104個(gè)，具體數(shù)量可根據(jù)細(xì)胞增殖快慢進(jìn)行調(diào)整。如果要使用較大的培養(yǎng)板，可在此基礎(chǔ)上調(diào)整細(xì)胞鋪板數(shù)，如12孔培養(yǎng)板，每孔可接種細(xì)胞數(shù)8*104個(gè)，建議實(shí)驗(yàn)者在此基礎(chǔ)上進(jìn)行適當(dāng)?shù)膬?yōu)化實(shí)驗(yàn)以選擇最佳細(xì)胞接種數(shù)量。

此外，siRNA的轉(zhuǎn)染和DNA的轉(zhuǎn)染不一樣，DNA的轉(zhuǎn)染是過量表達(dá)，死亡一些細(xì)胞對過量表達(dá)的蛋白本身來說影響不大，但siRNA的轉(zhuǎn)染，死亡的細(xì)胞所有的基因表達(dá)（包括特定目標(biāo)基因）都下降，將與siRNA造成的特定目標(biāo)基因的表達(dá)下降現(xiàn)象是一致的，將大大影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，因此選用低細(xì)胞毒性的轉(zhuǎn)染試劑也非常重要。目前，普通轉(zhuǎn)染試劑的主要成分為脂質(zhì)體或聚乙烯亞胺（PEI），這兩種成分都具有很大的細(xì)胞毒性，所以要求的細(xì)胞密度也較高，而Starvio siRNA采用的是新型可降解納米材料，毒性很低，只需要30-50%的細(xì)胞密度就可進(jìn)行轉(zhuǎn)染，實(shí)驗(yàn)者可放心按照說明書進(jìn)行，切勿帶入常規(guī)轉(zhuǎn)染試劑的細(xì)胞密度要求進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。