DNA和siRNA轉(zhuǎn)染是細胞生物學(xué)最常見的實驗之一。對于此類核酸轉(zhuǎn)染實驗，轉(zhuǎn)染試劑的選擇尤為重要。從嚴格的專業(yè)角度看，由于DNA和siRNA在分子大小、載電荷以及分子構(gòu)型方面存在較大差異，DNA轉(zhuǎn)染最好選擇專門的DNA轉(zhuǎn)染試劑，siRNA轉(zhuǎn)染最好選擇專門的siRNA轉(zhuǎn)染試劑。但有些研究者需要將兩者同時或先后轉(zhuǎn)入細胞，也有些研究者經(jīng)費不夠?qū)捲?，出于實驗需求，這些研究者都希望配置一款既能轉(zhuǎn)染DNA又能轉(zhuǎn)染siRNA的轉(zhuǎn)染試劑。

目前，市場上既能高效轉(zhuǎn)染siRNA又能高效轉(zhuǎn)染DNA的轉(zhuǎn)染試劑非常之少。其中，Lipo3000(Lipofectamine3000)是國際公認的既可轉(zhuǎn)染siRNA又可轉(zhuǎn)染DNA的權(quán)威品牌，Starvio DNA&siRNA是海歸科學(xué)家研發(fā)的較為知名的國產(chǎn)品牌，擁有核心知識產(chǎn)權(quán)，采用可降解生物納米材料配制而成。Starvio DNA&siRNA與Lipo3000相比，各自的性能特點如何，本文擬從轉(zhuǎn)染性能、毒性和操作簡便性三個方面簡述如下。

一、轉(zhuǎn)染性能

轉(zhuǎn)染性能是研究者在選擇轉(zhuǎn)染試劑時最為關(guān)注的指標。一款轉(zhuǎn)染試劑無論對于普通的細胞株還是難轉(zhuǎn)染的細胞，都具有不錯的轉(zhuǎn)染效率才能成為研究者的“實驗好搭檔”。

? 在普通細胞株中的轉(zhuǎn)染

Hela細胞是實驗室常用的宮頸癌細胞株，由于具有無限增殖的特性，常被用于腫瘤研究、細胞轉(zhuǎn)染等實驗中。在驗證轉(zhuǎn)染試劑性能時，也常將這種細胞株用于質(zhì)量控制。我們使用Starvio DNA&siRNA和Lipo3000分別轉(zhuǎn)染Cy3-siRNA到Hela細胞中，并于24h在熒光顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染效率，結(jié)果顯示兩款轉(zhuǎn)染試劑對siRNA的轉(zhuǎn)染陽性率均達到了90%以上（圖A和B）。

圖A Starvio DNA&siRNA轉(zhuǎn)染Cy3-siRNA于Hela細胞，24h	圖B Lipo3000轉(zhuǎn)染Cy3-siRNA于Hela細胞，24h

在進行DNA轉(zhuǎn)染性能比較時，我們選取了AAV-293細胞。AAV-293是進行病毒包裝和重組蛋白表達較為常用的工程細胞，我們使用Starvio DNA&siRNA和Lipo3000分別轉(zhuǎn)染GFP質(zhì)粒到AAV-293細胞中，48h觀察兩組轉(zhuǎn)染效率。結(jié)果顯示，Starvio DNA&siRNA和Lipo3000在AAV-293細胞中的轉(zhuǎn)染陽性率非常相近，均達到了90%以上（圖C和D），而Starvio DNA&siRNA的細胞熒光似乎更為強烈。

圖D Lipo3000轉(zhuǎn)染GFP質(zhì)粒于AAV-293細胞，48h	圖C Starvio DNA&siRNA轉(zhuǎn)染GFP質(zhì)粒于AAV-293細胞，48h

? 在較難轉(zhuǎn)染的原代細胞中的表現(xiàn)

為了進一步探究Starvio DNA&siRNA和Lipo3000的轉(zhuǎn)染實力，我們在較難轉(zhuǎn)染的原代細胞中也進行了實驗。同樣，我們將siRNA和質(zhì)粒DNA分別轉(zhuǎn)入原代肺癌細胞中，在24h及48h觀察其轉(zhuǎn)染結(jié)果。由于實驗中，使用Lipo3000的實驗組對原代肺癌細胞的毒性稍大，細胞死亡率較高，因此主要以Starvio DNA&siRNA的轉(zhuǎn)染結(jié)果來和大家做個分享。根據(jù)熒光圖顯示，在原代肺癌細胞中，Starvio DNA&siRNA對質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染陽性率可達85%，對siRNA的轉(zhuǎn)染陽性率可達90%（圖E和圖F）。這樣的轉(zhuǎn)染結(jié)果其實是非常難得的，對于經(jīng)常與原代細胞打交道的研究者們來說也是一個好消息。我們都知道，原代細胞是直接從機體分離培養(yǎng)的細胞，細胞膜相對較厚，而且表面有許多微絨毛和微細突起，這些結(jié)構(gòu)會影響轉(zhuǎn)染試劑與細胞膜的結(jié)合，從而降低轉(zhuǎn)染效率。由于原代細胞對環(huán)境毒性較為敏感，在進行轉(zhuǎn)染實驗時，細胞的死亡率也會大大高于普通細胞株。因而，原代細胞的轉(zhuǎn)染存在較大的難度，研究者往往很難尋找到一款理想的轉(zhuǎn)染試劑。

圖E Starvio DNA&siRNA轉(zhuǎn)染GFP質(zhì)粒于原代肺癌細胞，48h	圖F Starvio DNA&siRNA轉(zhuǎn)染Cy3-siRNA于原代肺癌細胞，24h

二、細胞毒性

為了比較Starvio DNA&siRNA和Lipo3000的細胞毒性，我們在原代大鼠主動脈平滑肌細胞中進行了小核酸NC-FAM轉(zhuǎn)染。結(jié)果顯示，Starvio DNA&siRNA轉(zhuǎn)染后的細胞死亡率只有5%左右，與空白對照的細胞死亡率幾乎一致，這說明Starvio DNA&siRNA的細胞毒性極低，可能與其成分主要為可降解生物材料有關(guān)。使用Lipo3000進行轉(zhuǎn)染，細胞死亡率約在10%左右，比Starvio DNA&siRNA略高?？傮w而言，兩款轉(zhuǎn)染試劑的細胞毒性都不算太高，研究者并不需要擔心因細胞毒性太大而對實驗結(jié)果產(chǎn)生較大的影響。如果是對毒性較為敏感的細胞株或原代細胞，使用Starvio DNA&siRNA轉(zhuǎn)染效果可能更為理想。

圖G Starvio DNA&siRNA轉(zhuǎn)染NC-FAM于原代大鼠主動脈平滑肌細胞24h明場圖	圖H Starvio DNA&siRNA轉(zhuǎn)染NC-FAM于原代大鼠主動脈平滑肌細胞24h熒光圖

三、操作簡便性

轉(zhuǎn)染試劑的操作簡便性主要看二個方面，一方面看在實驗過程中是否需要頻繁的換液，另一方面看是否需要購買其它的配套試劑。使用Starvio DNA&siRNA，在制備轉(zhuǎn)染復(fù)合物時，只需要加入實驗室常備的1640或DMEM即可，不需要購買轉(zhuǎn)染試劑以外的其它試劑，沒有額外花費。使用Lipo3000，在制備轉(zhuǎn)染復(fù)合物時，則需要加入Opti-MEM? I減血清培養(yǎng)基，該試劑需要另外購買。換液方面，使用Starvio DNA&siRNA，在轉(zhuǎn)染復(fù)合物加入細胞培養(yǎng)孔之后6小時，細胞生長狀態(tài)良好，并不需要換液，這顯然與Starvio DNA&siRNA的細胞毒性較低有關(guān)。使用Lipo3000，在轉(zhuǎn)染復(fù)合物加入細胞培養(yǎng)孔之后6小時左右，建議最好更換新鮮的培養(yǎng)基。

總體而言，Starvio DNA&siRNA具有非常優(yōu)異的DNA和siRNA轉(zhuǎn)染性能，完全可以媲美Lipo3000。對于一些對細胞毒性較為敏感的細胞株或原代細胞，使用Starvio DNA&siRNA轉(zhuǎn)染效果可能更為理想。對于一些希望控制研究經(jīng)費的研究者，Starvio DNA&siRNA也是一個比較理想的選擇。